1.范圍

GB/T 18932的本部分規定了蜂蜜中土霉素、四環(huán)素、金霉素、強力霉素殘留量液相色譜測定方法。

本部分適用于蜂蜜中土霉素、四環(huán)素、金霉素、強力霉素殘留量的測定。

本部分的方法檢出限:土霉素、四環(huán)素、金霉素、強力霉素均為0.010mg/kg。

2.規范性引用文件

下列文件中的條款通過(guò)GB/T 18932的本部分的引用而成為本部分的條款。凡是注日期的引用文件,其隨后所有的修改單(不包括勘誤的內容)或修訂版均不適用于本部分,然而,鼓勵根據本部分達成協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的*新版本。凡是不注日期的引用文件,其*新版本適用于本部分。

GB/T 測試方法的精密度 通過(guò)實(shí)驗室間試驗確定標準測試方法的重復性和再現性(neq ISO 5725:1981)

GB/T 分析實(shí)驗室用水規格和試驗方法(neq ISO 3696:1987)

3.原理

試樣中四環(huán)素族抗生素殘留用0.1mol/LNa2 EDTA-Mcllvaine(pH=4.0±0.05)緩沖溶液提取,經(jīng)離心后,上清液用 Oasis hLB或相當的固相萃取柱和陰離子交換柱凈化,紫外檢測器高效液相色譜儀測定,外標法定量。

4.試劑和材料

除另有說(shuō)明外,所用試劑均為分析純,水為GB/T 規定的一級水。

4.1 甲醇:一級色譜純。

4.2 乙腈:一級色譜純。

4.3 乙酸乙酯:重蒸餾。

4.4 磷酸氫二鈉(Na2HPO·2H2O):優(yōu)級純。

4.5 檸檬酸(C6H8O7·H2O)。

4.6 乙二胺四乙酸二鈉(Na2EDTA·2H2O)。

4.7 草酸

4.8 磷酸氫二鈉溶液:0.2mol/L。稱(chēng)取28.41g磷酸氫二鈉(4,4),用水溶解,定容至1000mL。

4.9 檸檬酸溶液:0.1mo/L。稱(chēng)取21.01g檸檬酸(4.5),用水溶解,定容至1000mL。

4.10 Mcllvaine緩沖溶液:將1000mL0.lmol/L檸檬酸溶液(4.9)與625mL0.1mol/L磷酸氫二鈉溶液(4.8)混合,必要時(shí)用氫氧化鈉或鹽酸溶液調節pH=4.0±0.05。

4.11 Na2EDTA- Mcllvaine緩沖溶液:0.1mol/L。稱(chēng)取60.5g乙二胺四乙酸二鈉(4.6)放入1625 mL Mcllvaine緩沖溶液(4.10)中,使其溶解,搖勻。

4.12 甲醇十水(1+19):量取5mL甲醇(4.1)與95mL水混合。

4.13 Oasis HLB固相萃取柱或相當者:500mg,6mL。使用前分別用5m甲醇和10mL水預處理,保持柱體濕潤。

4.14 陰離子交換柱:羧酸型,500mg,3mL。使用前用5mL乙酸乙酯預處理,保持柱體濕潤。

4.15 土霉素、四環(huán)素、金霉素、強力霉素標準物質(zhì):純度≥95%。

4.16 土霉素、四環(huán)素、金霉素、強力霉素標準溶液:0.1mg/mL。準確稱(chēng)取適量的土霉素、四環(huán)素、金霉素、強力霉素標準物質(zhì)(4.15),分別用甲醇配成0.1mg/mL的標準儲備液。儲備液貯存在-18℃。

根據需要用流動(dòng)相逐級稀釋成適當濃度的混合標準工作溶液,混合標準工作溶液在4℃保存,可使用3天。

5.儀器

5.1 高效液相色譜儀:配有紫外檢測器。

5.2 分析天平:感量0.1mg,0.01g。

5.3 液體混勻器。

5.4 固相萃取真空裝置。

5.5 貯液器:50mL。

5.6 微量注射器:25μL,100μL。

5.7 刻度樣品管:5mL,精度為0.1mL。

5.8 真空泵:真空度應達到80kPa。

5.9 離心管:50mL。

5.10 平底燒瓶:100mL。

5.11 pH計測量精度±0.02。

6.試樣的制備與保存

6.1 試樣的制備

對無(wú)結晶的實(shí)驗室樣品,將其攪拌均勻。對有結晶的樣品,在密閉情況下,置于不超過(guò)60℃的水浴中溫熱,振蕩,待樣品全部融化后攪勻,迅速冷卻至室溫。分出0.5kg作為試樣。制備好的試樣置于樣品瓶中,密封,并標明標記。

6.2 試樣保存

將試樣于常溫下保存。

7.測定步驟

7.1 提取

稱(chēng)取6g試樣,**到0.01g。置于150mL三角瓶中,加入30mNa2 EDTA-Mcllvalne緩沖溶液(4.11),于液體混勻器上快速混合1min,使試樣完全溶解。樣液倒入50mL離心管中,以3000r/min離心5min,待凈化。

7.2 凈化

將上清液(7.1)倒入下接 Oasis HLB柱或相當者(4.13)的貯液器中,上清液以≤3mL/min的流速通過(guò)Oass或相當的固相萃取柱,待上清液完全流出后,用5mL甲醇十水(4.12)洗柱,棄去全部流出液。在65kPa的負壓下,減壓抽干20min,*后用15mL乙酸乙酯(4.3)洗脫收集洗脫液于100mL圓底燒瓶中。

按上述方法使洗脫液(7.2)在減壓情況下以≤3mL/min的流速通過(guò)陰離子交換柱(4.14),待洗脫液全部流出后，用5mL甲醇(4.1)洗柱，棄去全部流出液。在65kPa負壓下，減壓抽干5min，再用4mL流動(dòng)相洗脫，收集洗脫液于5mL樣品管中，定容至4mL，供液相色譜儀測定。